Spermogram i spermocitogram

Šta pokazuje spermogram, a šta spermocitogram

Spermogram je nativni pregled sperme. Daje podatke o ukupnom broju spermatozoida i procentu progresivno pokretnih, ne-progresivno pokretnih, slabo pokretnih i nepokretnih spermatozoida. Uz to se određuju zapremina, viskoznost, brzina likvefakcije, pH i boja ejakulata, kao i podaci o aglutinaciji i agregaciji spermatozoida.

Spermocitogram je deo pregleda koji se radi na velikim mikroskopskim uvećanjima, većim od 400 puta, i pruža informacije o morfologiji spermatozoida. Procenjuje se i prisustvo i broj drugih ćelija, kao što su leukociti, eritrociti, epitelne ćelije, nezrele forme spermatozoida i bakterije.

Priprema i dostavljanje uzorka

Za pouzdan nalaz potrebna je minimalna priprema:

• Apstinencija treba da traje od 2 do 7 dana.
• Ne sme biti kraća od 48 časova, jer tada može značajno uticati na ukupan broj spermatozoida.
• Apstinencija duža od 7 dana smanjuje broj progresivno pokretnih spermatozoida.
• Najbolje je da uzorak bude prikupljen u samoj laboratoriji ili da se dopremi u roku od 60 minuta, ako temperaturni uslovi to dozvoljavaju (20-35 °C).
• Posuda za uzorak treba da bude od stakla ili plastike testirane na netoksičnost prema spermatozoidima.

Parametri koji se procenjuju

• Likvefakcija ili razvodnjavanje sperme odvija se pod uticajem enzima iz prostate, najduže u roku od 60 minuta, pri temperaturi 20-37 °C, kada su enzimi optimalno aktivni. Izostanak likvefakcije u tom roku ukazuje na poremećaj funkcije prostate.
• Viskoznost se ispituje Drop testom, odnosno Comhaireovim testom formiranja kapljice. Povećana viskoznost otežava kretanje spermatozoida, a na nju utiče i broj ćelija: veća koncentracija ćelija čini semenu tečnost viskoznijom.
• Zapremina normalnog ejakulata je veća od 2 ml. Smanjena zapremina je najčešće udružena sa poremećajima spermatogeneze, funkcije semenih žlezda i prostate.
• Broj ćelija u normalnom spermogramu je veći od 20 miliona spermatozoida po kubnom centimetru. Smanjen broj ukazuje na poremećaj spermatogeneze, a povećan broj leukocita, eritrocita, epitelnih ćelija ili bakterija na infekciju ili zapaljenjski proces autoimunske prirode.
• Aglutinacija i agregacija označavaju slepljenost spermatozoida ili njihovo povezivanje u veće konglomerate, u čemu posreduju anti-spermatozoidna antitela ili druge ćelije, najčešće leukociti. Konglomerati onemogućavaju usmereno kretanje i normalnih spermatozoida, a najčešće su posledica hroničnih zapaljenjskih procesa, povreda i hirurških intervencija.

Pokretljivost spermatozoida

Pokretljivost je podjednako važna kao i broj spermatozoida. Ako je broj normalan, a prisutan je veliki broj slabo pokretnih ili nepokretnih spermatozoida, spermogram se ne može kvalifikovati kao normalan. Prema pokretljivosti spermatozoidi se dele u četiri kategorije:

• (A) rapidno progresivno pokretni, odnosno aktivirani i hiperaktivni;
• (B) sporo progresivno pokretni;
• (C) ne-progresivno pokretni, slabo i cirkularno pokretni;
• (D) nepokretni.

Putanja progresivno pokretnih spermatozoida je prava ili blago zakrivljena linija, najčešće u vidu slova S i C, pri brzini kretanja ne manjoj od 20 mikrona u sekundi. Cirkularno pokretni spermatozoidi mogu se kretati i brže, ali je njihova putanja kružna ili spiralna, bez značajnog pomaka u prostoru. Smatra se da samo progresivno pokretni, aktivirani i hiperaktivni spermatozoidi mogu doći u priliku da oplode jajnu ćeliju.

Morfologija spermatozoida

Radi lakšeg opisivanja odstupanja, spermatozoid se opisuje kao glava, srednji deo, vrat i rep. Silueta glave normalnog spermatozoida je elipsa dimenzija oko 4,0 x 5,5 mikrona, a manje varijacije u obliku i veličini moguće su i kod normalnih ćelija.

• Abnormalnim se smatraju spermatozoidi sa manjom ili većom glavom i oni čiji oblik značajno odstupa od normalnog (kruškaste glave, tapering forme), kao i oni sa dve glave.
• Česti su i spermatozoidi sa defektom akrozomalne kape, koja normalno zauzima 30 do 50% zapremine glave.
• Anomalije srednjeg dela odnose se na takozvane cytoplasmic droplets forme; nalaz se smatra patološkim samo kada je procenat takvih spermatozoida veći od 30%.
• Anomalije vrata odnose se na ugao ose glave i repa u odnosu na vrat i srednji deo.
• Najčešće anomalije repa su kratak, dugačak, prelomljen, dupli, detached, hairpin i Dag rep. Normalna dužina repa je 35 do 45 mikrona.

Dodatne analize sperme

Ostale analize obuhvataju biohemijske parametre, kao što su koncentracija fruktoze, cinka i kisele fosfataze. Imunološke analize se odnose na detekciju anti-spermatozoidnih antitela u semenoj tečnosti Immunobead ili MAR testom, a ova antitela je moguće detektovati i u krvi ELISA testom.

Bakteriološko ispitivanje se izvodi spermokulturom, koja daje podatke o prisustvu, vrsti i broju mikroba koji mogu kompromitovati oplodnu moć. Na osnovu spermokulture izrađuje se antibiogram, iz kojeg se vidi na koje su antibiotike izolovani mikrobi osetljivi.

Kompjuterska analiza sperme (CASA)

Kompjuterski asistirana analiza sperme (CASA) je poluautomatizovan ili potpuno automatizovan sistem koji čine mikroskop, specijalna komora za analizu uzorka, digitalna kamera visoke rezolucije, računar i odgovarajući softver.

Prednost ovakve analize nije samo u brzini obrade podataka, već pre svega u preciznosti i u podacima koje klasičnim pregledom nije moguće dobiti. To se odnosi na određivanje procenta pokretljivih spermatozoida i na kvantifikaciju kvaliteta pokretljivosti: izračunavanjem putanje svakog spermatozoida jasno se razdvajaju progresivno pokretni od cirkularno pokretnih. CASA je doprinela standardizaciji analize i isključivanju subjektivnog tumačenja rezultata, koje je bilo prisutno pri klasičnom analiziranju spermograma.

Priprema spermatozoida za inseminaciju

Novija istraživanja pokazuju da kratkotrajna inkubacija spermatozoida sa lipozomalnom frakcijom progesterona ili sa PGE1 značajno povećava njihovu pokretljivost i sposobnost da se vežu za zonu pelucidu, što je osnovni preduslov oplođenja jajne ćelije.

Ovakvo kondicioniranje spermatozoida pred inseminaciju je jednostavna procedura. Mehanizam se objašnjava povećanjem cAMP i otvaranjem kalcijumskih kanala membrane spermatozoida, koji se nalaze pretežno u vratnom delu ćelije.